X-α-Gal是α-半乳糖苷酶（α-Galactosidase）的显色反应底物。α-半乳糖苷酶可水解无色的X-α-Gal底物，生成蓝色的产物。
X-α-Gal常用于GAL4酵母双杂交系统中MEL1报告基因的表达检测。MEL1基因编码外分泌型的α-半乳糖苷酶。将X-α-Gal直接加在培养基中，如果蛋白无互作，报告基因MEL1不表达，菌落呈乳白色。如果蛋白发生互作，报告基因MEL1表达，菌落呈蓝色，亦可根据菌落蓝色深浅，初步判断蛋白互作强度。此外，X-α-Gal与缺陷型筛选平板同时使用，可有效提高筛选效率，排除假阳性克隆。
X-α-Gal也可用于筛选含α-半乳糖苷酶基因的细菌菌株，区分肠杆菌科内的不同菌种，以及区分双歧杆菌和乳酸菌，组织化学中用于酶活性的检测等。
