考马斯亮蓝G250(Coomassie brilliant blue G250),考马斯亮蓝G-250在流离状态下呈红色,最大光吸收在465nm;当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比。是常用蛋白染色剂,可用于染色丙烯酰胺凝胶和琼脂糖凝胶中的蛋白质。考马斯亮蓝G-250由于与蛋白质的结合反应十分迅速,常用来作为蛋白质含量的测定。当考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后变为青色,蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比,因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡,完成反应十分迅速;其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立,试剂配制简单,操作简便快捷,反应非常灵敏,灵敏度比Lowry法还高4倍,可测定微克级蛋白质含量,测定蛋白质浓度范围为0~1000μg/mL,最小可测2.5μg/mL蛋白质,是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
物理性状及指标:
外观:……………………暗蓝-紫-棕色固体
熔点:……………………>100℃
溶解性:…………………Water:40mg/ml;Ethanol:40mg/ml;DMSO:10mg/ml;DMF:0.5 mg/ml
最大吸收波长:…………610nm
储存条件:常温,避光防潮密闭干燥
运输条件:常温运输(按季节)
产品用途:科研试剂,广泛应用于分子生物学、药理学、免疫学等科研方面,严禁用于人体。本品可作为分析生化、SDS-PAGE和BN-PAGE中蛋白质染色剂,也可作为P2X7嘌呤能受体拮抗剂。
考马斯亮蓝G-250配制:
称取100mg考马斯亮蓝G-250。
溶于50ml90%乙醇中。
加入85%的磷酸10ml。
最后用蒸馏水定溶到1000ml。
(此溶液在常温下可放置一个月。)
【考马斯亮蓝染色法的缺点】
(1)由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同,因此考马斯亮蓝染色法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差,在制作标准曲线时通常选用g-球蛋白为标准蛋白质,以减少这方面的偏差。
(2)该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的,但不适用于小分子碱性多肽的定量。还有一些物质干扰此法的测定,如核糖核酸酶或溶菌酶;去污剂的浓度超过0.2%影响测定结果,如TritonX-100、SDS、NP-40等。